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RIPA主要是從動物組織和動物細胞中抽取的可溶性蛋白。

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的Western、IP等。

RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多種，根據其裂解液的強度大致可以分為強、中、弱三類。關于不同的RIPA裂解液以及龙8娱乐官方网站生產的其它裂解液的主要特點和差異，以及如何選擇裂解液可參考附錄。

組成: 50 mM(pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40,

0.1% SDS.(配有一支PMSF).使用RIPA裂解達到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去污劑，不能用Bradford法測定RIPA裂解后的蛋白濃度。

保存: 4℃;避光

RIPA裂解液(強)的主要成分為50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1%TritonX-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDTA，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多種抑制劑。可以有效抑制蛋白降解。

RIPA裂解液(中)的主要成分為50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate。

使用方法

對于培養細胞樣品:

1. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。

2.對于貼壁細胞:去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后，細胞就會被裂解。

對于懸浮細胞:離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解。

裂解液用量說明:通常6孔板每孔細胞加入150微升裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200微升或250微升。

對于組織樣品:

1. 把組織剪切成細小的碎片。

2. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。

3. 按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。)

4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

6. 如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

注:RIPA裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物，屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組

DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續實驗;如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子，例如NFκB、p53等時，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉錄因子。